אנזימי הגבלה הם אנזימים שחותכים את הדנ"א החד- כל אנזים הגבלה יש רצף נוקליאוטידים מסוים, הנקרא אתר הגבלה, כי הוא מזהה וחתכים. אנזימי הגבלה משמשים רצף דנ"א, ניתוח מוטציה, שיבוט והגברה של ה- DNA. מדענים משתמשים באנזימי הגבלה כדי להכניס גנים של עניין לצורות ביטוי, מולקולות דנ"א היכולות לשכפל בנפרד מדנ"א כרומוזומלי. את הווקטור המכיל את הגן של עניין ניתן לאחר מכן להיות הציג לתוך זן חיידקי עבור ביטוי ואפיון של חלבונים.
וידאו של יום
שלב 1
זיהוי אתרי אנזים הגבלה על וקטור שלך על ידי הסתכלות על מפת הגבלה. מפת ההגבלה תאמר לכם אילו אנזימים יחתכו את הווקטור שלכם, והיכן.
שלב 2
בחר אנזים הגבלה כי יש גם האתר הנוכחי על הוספת הגן שלך, על ידי הסתכלות על רצף של הכנס. ודא שהאתר הגבלה נמצא במיקום בתוסף שנמצא מחוץ לגן המעניין, כך שאינך מאבד חלק כלשהו של הגן.
שלב 3
ודא כי אין כפילויות של אתר ההגבלה בכל מקום להכניס את הגן או וקטור. זה יגרום חתכים מרובים ב- DNA שלך ולתת לך נתונים מטעים.
שלב 4
נסה לבחור אנזימים הגבלה לחתוך עם קצוות דביקים, ולא קצוות קהה. מסתיים דביק להתרחש כאשר האנזים חותך DNA כפול תקועים בצורה מתנודדת, עוזב התלוי אחד גדיל המאפשר לקשר עם חתך להוסיף בצורה הפוכה. קצוות קהים מתרחשים כאשר הדנ"א בעל גדילה כפולה הוא חתך בצורה חלקה, ואלה קשה יותר לצרף.
שלב 5
בחר אנזים הגבלה אחרת עבור שני הקצוות של הכנס שלך כדי לוודא שהוא מוכנס לתוך וקטור בכיוון הנכון כדי להבטיח את הקטור לא לצרף מחדש את עצמו.
שלב 6
נסה לבחור שני אנזימים הגבלה אשר פועלים היטב במערכת חיץ זהה והטמפרטורה. אם הדבר אינו אפשרי, הפעל כל עיכול בנפרד.
דברים שאתה צריך
- רצף של הוספת גן
- מפת הגבלת עבור וקטור הבחירה
- רשימה של אנזימים הגבלת אתרי חיתוך שלהם
טיפים
- כמה תוכניות אינטרנט פותחו לזהות אתרי הגבלה על רצף DNA במהירות. אחד כזה הוא תוכנית New England BioLabs.
